Определение числа тромбоцитов в крови можно проводить следующими методами:

1. Подсчет в камере.

2. В автоматических счетчиках.

3. В мазке крови.

Подсчет в камере проводят по методу Хауке. Для этого 0,5 мл 1%-го раствора трилона Б смешивают с 0,5 мл крови (разведение 1:1). Затем в лейкоцитарный меланжер набирают кровь до метки "1", а до метки "11" - 1%-й раствор аммония оксалата (получается разведение крови 1:20). Сме­ситель встряхивают и оставляют не менее чем на 20 мин для гемолиза эритроцитов. Счетную камеру заправляют общепринятым способом, подсчет тромбоцитов ведут через 5-7 мин в 5 больших квадратах, расположенных по диагонали, которые разделены на 16 маленьких квадратиков. Расчет проводят по формуле:

Х = --------- = А*1000/мкл = А*10⁹/л

80*1/4000
Подсчет тромбоцитов в мазке крови (метод Фонио) проводится на 1000 эритроцитов. Кровь для мазков берут у животных из краевых вен уха. Предварительно на место укола наносят каплю 14%-го раствора маг­ния сульфата для предотвращения склеивания тромбоцитов. Выделившуюся каплю крови смешивают с раствором и изготавливают мазки, которые затем окрашивают по Романовскому. Подсчет производят под иммерсионной систе­мой микроскопа, одновременно считаются тромбоциты и эритроциты. Зная абсолютное количество эритроцитов производят расчет и тромбоцитов. Например: при подсчете на 1000 эритроцитов встретилось 60 тромбоцитов, количество эритроцитов 5,0*10¹²/л, следовательно количество тромбоци­тов составляет 300*10⁹/л.

В крови здоровых животных и птицы содержится следующее количество тромбоцитов: крупный рогатый скот - 260-700; лошади - 200-500; свиньи - 180-300; куры - 32-100 на 10⁹/л.

Наследственные геморрагические диатезы у животных встречаются (или диагностируются) редко, преимущественно у собак, свиней и лошадей. Приобретенные дефекты в системе гемостаза, как правило, множественные и обусловлены разными заболеваниями и патологическими воздействиями: иммунные поражения сосудистой стенки и тромбоцитов, токсико-инфекционные поражения кровеносных сосудов, заболевания печени, действие лекарственных веществ и др. Приобретенные дефекты в системе гемостаза меняются с изменением течения основного заболевания и при разрешении болезни исчезают. При всех геморрагических диатезах ведущим клиническим проявлением является геморрагический синдром, который охватывает все виды кровоточивости.

Ведущие симптомы синдрома: кровоизлияния различного характера и величины в кожу, подкожную клетчатку, в слизистые оболочки, ткани и полости организма; гематомы и кровотечения при незначительных травмах и хирургических вмешательствах; тромбоцитопения; понижение свертываемости крови (удлинение времени кровотечения). Геморрагический диатез, обусловленный недостаточностью аскорбиновой кислоты (скорбут, цинга), проявляется кровоточивостью десен, образованием на них язв, расшатыванием зубов, опуханием суставов.

Геморрагический синдром развивается при гемофилии, кровопятнистой и лучевой болезнях, остром токсическом и хроническом гепатитах, подпеченочной желтухе, авитаминозах А, С, К, Р, при ряде бактериальных и вирусных инфекций (сибирская язва, пастереллез, чума свиней и плотоядных и др.); при токсикозах и аллергических заболеваниях.

1. Морфология лейкоцитов крови у животных разных видов.

2. Лейкограмма крови и ее диагностическая значимость.

3. Видовые лейкоцитозы и лейкопении, их клиническая оценка.

3.1. Изменение содержания эозинофилов и базофилов.

3.2. Нейтрофилия и нейтропения.

3.3. Увеличение или уменьшение содержания лимфоцитов и моноцитов.

Синдромы нарушения лейкопоэза.

В зависимости от свойств цитоплазмы и характера зернистости лейкоциты разделяют на гранулоциты (зернистые) — базофилы, эозинофилы и нейтрофилы, и агранулоциты (незернистые) — лимфоциты и моноциты.

Базофилы круглой или немного овальной формы, имеют величину 10-14 мкм. У зрелых форм ядро полиморфное, плохо заметное, с неясными очертаниями, окрашено в слабо-фиолетовый цвет с бордовым оттенком или в фиолетовый цвет. Цитоплазма слабо окрашена в розовый или бледно-фиолетовый цвет вследствие выхождсния вещества гранул, которые разрушаются при окраске мазка. Гранулы круглой или расплывчатой формы, окрашены в темно-фиолетовый, темно-синий или черный цвет, они обычно разрушены с образованием вакуолей.

Эозинофилы круглой формы, величиной 10-25 мкм. Цитоплазма слабоголубая, содержит розово-красную или ярко-красную зернистость круглой или слегка овальной формы. Характер ядра зависит от степени зрелости клетки: у зрелых форм оно сегментированное, у молодых — округлое; окрашено в фиолетовый цвет. У лошадей, крупного рогатого скота и свиней ядро чаще состоит из двух сегментов, а у овец, коз и собак — из трех. Наиболее крупные гранулы у лошадей и собак. У кошек гранулы расположены в цитоплазме зозинофилов очень густо и нередко имеют палочковидную форму неодинаковой величины. При растворении гранул на месте их образуются вакуоли, в раздавленных клетках гранулы лежат свободно, «рассыпавшись».

Нейтрофилы имеют круглую форму, размером 10-15 мкм. По степени зрелости различают миелоциты, юные (метамиелоциты), палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы.

Миелоциты (М) характеризуются неравномерно окрашенным в фиолетовый цвет круглым или овальным ядром, расположенным часто эксцентрически. Цитоплазма окрашена или в бледно-синеватый или розовый цвет, в ней содержится мелкая зернистость розового цвета. В крови здоровых животных не встречаются.

Юные нейтрофилы имеют бобовидные или колбасовидное ядро, неравномерно окрашенное в фиолетовый цвет (светлые участки перемежаются с темными) Цитоплазма розового цвета, иногда плохо прокрашеная, содержит мелкую, нежную зернистость розового цвета. У взрослых здоровых животных в периферической крови они, как правило, не обнаруживаются.

Палочкоядерные нейтрофилы относятся к зрелым формам и у здоровых животных постоянно встречаются в крови. Ядро вытянуто в виде палочки, которая может быть изогнута в виде подковы, дужки, латинской буквы S, на концах булавовидно вздуто, в отдельных местах наблюдаются перехваты, окрашивается неравномерно в темно-фиолетовый цвет. Цитоплазма розового цвета с мелкой розоватой зернистостью (часто плохо видна).

Сегментоядерные нейтрофилы отличаются от палочкоядерных лишь характером ядра, которое состоит из 2—5 сегментов, между которыми имеются перемычки; окрашивается в темно-фиолетовый цвет.

Лимфоциты по величине разделяют на малые (до 10 мкм), средние (10—14 мкм) и большие (15-25 мкм). Они имеют круглое ядро темно-фиолетового цвета. Цитоплазма слабо-голубого цвета, вокруг ядра имеет зону просветления (перинуклеарная зона); у малых лимфоцитов ее может быть очень мало («голоядерные» лимфоциты); иногда в цитоплазме содержатся азурофильные зерна ярко-красного цвета. У здоровых животных в переферической крови преобладают малые лимфоциты, а средние и большие составляют не более 5—6%; в отдельных случаях они могут даже отсутствовать.

Моноциты являются самыми крупными клетками перефнрической крови (15-25 мкм), округлой или нередко неправильной формы. Ядро разнообразной формы — в виде подковы, бабочки, трилистника, бобовидное с выбухтовываниями, но может быть сильно лопастным и грубосегментированным, неравномерно окрашивается в слабо-фиолетовый цвет с темно-фиолетовыми пятнами («пятнистое»). Цитоплазма серо-дымчатого, серо-синеватого, голубовато-серого цвета, со светлофиолетовым оттенком, вблизи от ядра содержит мелкую пылевидную зернистость.
2. Лейкограмма крови и ее диагностическая значимость

При микроскопии мазков крови, наряду с морфологической оценкой форменных элементов, проводят дифференцированный подсчет лейкоцитов или выводят лейкограмму. Лейкограмма - это процентное соотношение раз­личных видов лейкоцитов, записанное в определенном порядке. В клини­ческой ветеринарной диагностике общепринятым является следующая после­довательность записи лейкоцитов: Б, Э, Н (М, Ю, П, С), Л и Мн.

Технику микроскопии мазка крови и выведения лейкограммы вы под­робнее рассмотрите на ЛПЗ. Остановимся только на следующих моментах. Существует несколько способов выведения лейкограммы: одно-, трех- и четырехпольный. Установлено, что наиболее точным и воспроизводимым яв­ляется четырехпольный способ.

Если при анализе крови не установлено отклонений в количественном отношении клеток и при исследовании лейкоцитов не обнаружено значи­тельных изменений ни в процентом соотношении, ни в их морфологии, то ограничиваются подсчетом 100 клеток. В противном случае считают не ме­нее 200 лейкоцитов. Лейкоциты регистрируют или в сетке Егорова, или посредством 11-клавишного счетчика.

Лейкограмма в комплексе с клиническим исследованием животного и другими анализами крови имеет большое диагностическое и прогностичес­кое значение. Вместе с тем, должен отметить, что лейкограмма дает представление только о процентном соотношении между видами лейкоцитов, но не позволяет судить об абсолютном их содержании в крови.

Увеличение процента клеток одного вида в лейкограмме снижает про­цент других видов лейкоцитов, хотя абсолютное их количество может быть в пределах нормы. Поэтому, зная общее количество лейкоцитов крови и процентное соотношение их видов в лейкограмме, рассчитывают абсолютное число клеток каждого вида по формуле:

Л(10⁹/л) = Л(%)хА(10⁹/л):100,

Вот такое выражение лейкограммы в абсолютных единицах называется лейкоцитарным профилем, он предложен Ш.Д.Мошковским.

При морфологической оценке клеток крови и выведении лейкограммы у животных при различной патологии можно выявить следующие изменения:

1) увеличение или уменьшение процента или абсолютного числа от­дельных видов лейкоцитов (видовые лейкоцитозы и лейкопении);

2) появление молодых, незрелых форм клеток;

3) патологические изменения в ядере и цитоплазме лейкоцитов.

Увеличение или уменьшение содержания отдельных видов лейкоцитов могут быть относительными или абсолютными. Если наряду с процентным увеличением или уменьшением какого-либо вида лейкоцитов происходит и количественное их изменение, то в этом случае говорят об абсолютном видовом лейкоцитозе или лейкопении. Если же изменяется только процент каких-дибо лейкоцитов, то нарушение носит относительный характер.

При ряде заболеваний в периферическую кровь могут попадать незрелые формы лейкоцитов. В отличие от релых форм молодые клетки чаще крупнее, в основном неправильной формы. Чем моложе клетка, тем больше размер ядра и ядерно-цитоплазматическое отношение. Форма ядра у молодых клеток круглая или слегка вогнутая, структура его более нежная, рыхлая и сглаженная (у зрелых ядро компактное). Чем моложе клетка, тем меньше сегментировано ядро.

Зрелые клетки не содержат нуклеол в ядре, а бласные формы имеют округлые ядрышки светло-синего или светло-фиолетового цвета. При наличии в ядре очень крупных ядрышек (нуклеол), превышающих по размеру треть диаметра ядра, клетка расценивается как патологическая.

Базопения в ветеринарной медицине не получила диагностического подтверждения и считается, что количество Б уменьшается параллельно с уменьшением количества Э.

Наиболее часто при заболеваниях у животных изменения в лейкограмме происходят среди нейтрофилов в сторону повышения незрелых форм клеток (сдвиг ядра влево) или увеличения количества сегментоядерных Н при одновременном уменьшении палочкоядерных (сдвиг ядра вправо). Индекс сдвига ядер нейтрофилов рассчитывается по формуле:

ИС=(М+Ю+П)/С.

ИС имеет диагностическое значение при нейтрофилии (нейтрофилез, нейтрофильный лейкоцитоз), которая встречается наиболее часто и условно делится на несколько типов:

1) нейтрофилия с простым регенеративным (гипорегенеративным) сдвигом ядра влево. Характеризуется увеличением количества П не более 10-13% при нормальном или несколько уменьшенном содержании С. Его наблюдают при хронических, скрыто протекающих инфекциях (туберкулез, и др.), легком течении острых инфекций, протозойных заболеваниях, гнойных местных процессах (нагноение ран, артрит, ограниченный тендовагинит и др.).

2) нейтрофилия с регенеративным сдвигом ядра характеризуется увеличением П с одновременным появлением Ю в небольшом количестве. При этом лейкоцитоз умеренный. Его наблюдают при острых инфекционных заболеваниях, эндокардите, септических процессах, у лошадей – после продолжительной тяжелой работе.

3) нейтрофилия с резким гиперрегенеративным сдвигом ядра характеризуется увеличением числа П, Ю и появлением М. Этот сдвиг указывает на резкое раздражение кроветворных органов. Если одновременно с этим отмечается лейкопения, то это результат угнетения функции костного мозга и является неблагоприятным признаком.

Такой сдвиг в картине крови наблюдают при тяжелом течении инфекционных и протозойных заболеваний, септических процессах, острых желудочно-кишечных заболеваниях у молодняка, начальной стадии миелолейкоза, отравлениях солями ртути и свинца, лизолом и др.

4) нейтрофилия с гипопластическим (дегенеративным) сдвигом ядра Н вправо характеризуется увеличением содержания С без увеличения процента незрелых клеток. При этом появляются измененные формы лейкоцитов, которые заключаются в появлении гиперсегментации ядра (до 20 и более сегментов), ядро может быть представлено отдельными округлыми частями без связи между собой, в цитоплазме появляются вакуоли, изменяется размер клеток (чаще увеличение). Вакуолизация не только цитоплазмы, но и ядра свидетельствует о тяжелом течении патологического процесса. Иногда отмечается в цитоплазме патологическая (токсическая зернистость), что является результатом интоксикации организма – чем сильнее интоксикация, тем более выражена зернистость.

Такой сдвиг в крови отмечается при тяжело протекающих инфекционных и незаразных заболеваниях с ярко выраженной интоксикацией органима, отравлениях, заболеваниях органов кроветворения, лучевой болезни.

Смена нейтропении нейтрофилией, а лейкопении лейкоцитозом говорит о возникновении осложнении (пневмонии, плеврита, перикардита и т.д.). Нейтропения может отмечаться при применении антибиотиков, сульфаниламидов, препаратов преднизолонового ряда.

Лимфоцитоз на фоне уменьшения количества эритроцитов отмечается при усилении интоксикации организма. Лимфоцитоз же с одновременным возрастанием количества эозинофилов и моноцитов при снижении числа нейтрофилов, считается благоприятным признаком.

При лейкозе, особенно лимфолейкозе, в крови появляются лимфобласты и пролимфоциты. Лимфобласты размером порядка 12-15 мкм и более, с большим округлым или овальным ядром, которое неравномерно окрашено и имеет рыхлую структуру. В ядре содержится 1-3 нуклеолы, цитоплазмы в клетке мало, она базофильная, имеет перинуклеарную зону. Пролимфоциты размером немного меньше чем лимфобласты, ядро компактное, грубой структуры, имеет 1-2 нуклеолы.

При тяжелых патологических процессах появляются измененные или патологические лимфоциты. Наиболее частые из них это увеличение размеров клеток и ядра. Так, если у здоровых животных преобладают в основном малые лимфоциты (средних и больших до 5%), то при инфекционных заболеваниях – большие (более 15 мкм). Из других, более тяжелых изменений, могут быть: цитоплазма серого цвета, ядро разнообразной формы, рыхлой структуры, в стадии деления, тени ядра (тени Боткина-Гумпрехта) и др.

Из морфологических изменений у моноцитов может быть увеличен размер клеток, нарушена структура ядра, изменен цвет цитоплазмы (диффузно-серая с желтоватым оттенком). Из незрелых форм в крови могут появляться монобласты и промоноциты. Монобласты – родоночальные клетки моноцитарного ростка размером до 20 и более мкм. Цитоплазма выражена незначительно, голубого цвета. Ядро имеет нежную структуру, содержит 2-3 нуклеолы. Промоноциты имеют более голубое ядро, у них нет нуклеол.

1. Лейкемический синдром проявляется увеличением лимфоузлов в размере, увеличением количества лейкоцитов появлением их патологических форм, абсолютным лимфоцитозом (у крупного рогатого скота % лимфоцитов составляет 75-90 и более).